RH 237(Rhodamine 237)是一种常用的膜电位荧光探针,主要用于检测细胞膜电位的变化。它在细胞生物学、神经科学和药物筛选等领域具有重要应用。
化学结构
结构:RH 237 是一种荧光染料,化学名称为 Rhodamine 237,分子式为 C₂₇H₃₀N₂O₃Cl,分子量约为 465.01 g/mol。
功能:RH 237 是一种阳离子荧光染料,能够特异性地结合到细胞膜的负电位区域,从而用于检测细胞膜电位的变化。
化学性质
荧光性质:
吸收波长:最大吸收波长约为 560 nm。
发射波长:最大发射波长约为 590 nm。
荧光强度:RH 237 的荧光强度与细胞膜电位成正比,膜电位越负,荧光强度越强。
生物相容性:
水溶性:RH 237 具有良好的水溶性,适合在生物体系中使用。
细胞摄取:RH 237 可以被细胞摄取并积累在细胞膜的负电位区域,特别是线粒体。
化学稳定性:
耐光性:RH 237 具有较好的耐光性,在长时间光照下荧光强度下降较慢。
耐化学性:在中性至弱酸性环境中较为稳定,但在极端条件下(如高温、强酸、强碱)可能会发生分解。
细胞成像中的应用
1. 细胞准备
细胞培养:
选择合适的细胞系(如 HeLa 细胞、CHO 细胞等),在含有 10% 胎牛血清(FBS)的 DMEM 或 MEM 培养基中培养。
将细胞培养至对数生长期,细胞密度约为 70-80%。
细胞固定(可选):
如果需要固定细胞,可以使用 4% 多聚甲醛(PFA)固定细胞。固定时间为 15-30 分钟,固定后用 PBS 洗涤 3 次,每次 5 分钟。
2. 染料标记
染料溶解:
将 RH 237 溶解在适量的 DMSO 中,制备成 1-10 µM 的母液。
根据实验需要,将母液稀释到细胞培养基中,最终浓度通常为 1-10 µM。
细胞染色:
将稀释后的 RH 237 溶液加入到细胞培养基中,轻轻混匀。
在 37°C、5% CO₂ 的培养箱中孵育细胞 15 分钟至 1 小时,具体时间根据细胞类型和实验需求调整。
洗涤:
孵育完成后,用 PBS 洗涤细胞 3 次,每次 5 分钟,以去除未结合的染料。
用荧光显微镜观察细胞,记录荧光信号。
3. 荧光成像
显微镜设置:
使用荧光显微镜,选择合适的激发波长(560 nm)和发射波长(590 nm)。
调整显微镜的光路和焦距,确保成像清晰。
成像:
拍摄细胞的荧光图像,记录荧光信号的分布和强度。
可以使用多通道成像,同时观察细胞的其他标记物(如 DAPI 标记细胞核)。
数据分析:
使用图像分析软件(如 ImageJ)对荧光图像进行分析,计算荧光强度、荧光分布等参数。
根据实验需求,进行定量分析或定性观察。
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